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您的細胞急需一份“身份”證明

 

ATCC發現很多用于基礎或生物醫學研究的細胞系并非來自于ATCC或其他細胞庫。很多時候,這些細胞系很少或者基本上沒有接受過細胞驗證。當用這些細胞進行研究的時候,最好對細胞進行驗證以保證實驗結果真實可靠。當用這些細胞發表文章的時候,文章的材料與方法部分應該包含細胞驗證的方法和細節。

到底哪些驗證實驗是ATCC推薦做的,請查看本期內容。

細胞系的驗證需要一系列的驗證實驗。通過驗證確認細胞系的身份以及證明該細胞系不存在污染。通過標準化的程序,細胞驗證可以確認細胞的來源,并確保有效的,可重復的實驗結果。若使用傳代次數過多、沒有定期檢測或者交叉污染的細胞進行實驗,往往造成虛假數據和實驗的不可重復性。

以下驗證實驗是ATCC推薦的基本驗證實驗:


1 細胞形態學檢查

通過顯微鏡觀察細胞的形態。這是鑒定細胞狀態最簡單和直接的方法。

Fig1 ATCC三種不同的細胞在高密度時候的狀態



2 生長曲線分析

通過細胞在某種刺激物下的增殖情況,可以獲得有價值的信息。若細胞增殖情況出現異常如突然增加或減少,說明該細胞系可能出現問題。

建立細胞生長曲線是監測細胞一致性的重要數據,也可以確定一些重要因素,比如什么時候該傳代,最佳的稀釋比率,以及不同細胞濃度下接種的有效性。生長曲線分析同時有助于確定細胞的倍增時間。在進行實驗的時候,請使用生長曲線一致的細胞。


3 同工酶分析驗證物種

同工酶分析可以用于鑒定細胞的物種來源。不同種屬的同工酶樣品電泳后會呈現不同的分布模式。通過電泳結果,可以判斷物種來源,以及樣品是否被其他種屬樣品污染。具體操作方法,請參考以下書籍:

Culture of Animal Cells:

A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney, 5th ed. Pp. 275 – 278


4 STR分析(DNA指紋)

STR基因位點由長度為3~7個堿基對的短串連重復序列組成,這些重復序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態性標記,被稱為細胞的DNA指紋。

每個細胞系都有唯一的STR重復模式。ATCC STR分析采用多重PCR同時擴增amelogenin 基因以及基因組中8個多態性marker。根據STR分型結果與STR數據庫比對從而推算出樣品所屬的細胞系或可能的交叉污染的細胞系名稱。

ATCC采用Promega PowerPlex®1.2系統及the Applied Biosystems Genotyper 2.0軟件對擴增產物進行分析。

 

Fig 2 STR分析結果


5 支原體檢測

作為細胞培養的主要問題,支原體污染對于細胞系產生很多不良影響。它通過不同的方式改變了細胞的行為和代謝方式。對于連續培養的細胞系,對細胞進行定期支原體檢測至關重要。其中一種相對簡單和可靠的支原體檢測方法是熒光染色法。Hoechst 33258熒光能夠特異性結合DNA。在顯微鏡(500X)下可以直觀的看到檢測細胞是否受到支原體的污染。

Fig 3 支原體陰性和陽性細胞

作為權威的生物資源中心,除了上述提到的基本檢測項目外,ATCC對所有批次細胞進行的檢測項目還包括凍存后的復蘇率,好氧或厭氧條件下的無菌測試,常見病毒等多項檢測。因此,您可以放心從ATCC購買細胞。

除了可以從ATCC獲得有保障的細胞外,ATCC STR分析的技術服務開始面向中國客戶。如果您想對實驗室里使用多年的或者從其他實驗室獲得的細胞進行STR分析,您僅需簡單三步就可完成。首先,中原公司會將ATCC 樣品收集試劑盒送到您手上。然后,您不需要抽提基因組DNA。只需要將細胞樣品點在試劑盒中提供的FTA卡上,風干后,將FTA卡放入試劑盒里提供的自封袋中,即完成樣品收集工作。最后,您僅需將樣品寄給ATCC,就可以坐等ATCC出報告。

 

 

中原生物是ATCC公司授權中國獨家代理

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